泥鳅一般2龄性成熟，1年可多次产卵，产卵期4—8月，其中，5—6月是产卵高峰期。最佳繁殖温度为24—27℃，20—29℃为繁殖的适温范围。雌鳅的怀卵量与体长有关，一般体长8厘米的雌鳅，其怀卵量为2000粒；体长10厘米的为7000粒；12厘米的怀卵量为10000—14000粒；20厘米以上雌鳅怀卵量可达24000粒。

长江中下游地区，一般在4月下旬开始，当水温达到20摄氏度以上时，泥鳅即可进行繁殖。主要的产卵场所为水田、池沼、沟渠等有清水流入的浅滩，在雨后或夜间，几尾雄鳅追逐一尾雌鳅，最后一尾雄鳅卷住雌鳅的躯干，使雌鳅受到刺激而排卵，雄鳅同时排精而完成受精过程。